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親和色譜法及其在我國(guó)的研究發(fā)展?fàn)顩r
  • 發(fā)布日期:2018-01-10      瀏覽次數(shù):5566
    • 親和色譜也稱為親和層析,是一種利用固定相的結(jié)合特性來分離分子的色譜方法。技術(shù)蓬勃發(fā)展,中國(guó)色譜專家同時(shí)也非常注重間色譜技術(shù)的交流。隨著間交流加深,中國(guó)的色譜技術(shù)已經(jīng)跟上了世界的步伐。色譜與生命科學(xué)的交叉研究、色譜與其它分析技術(shù)的聯(lián)用表現(xiàn)得異?;钴S。

      1.親和色譜 
      1.1色譜概述   
      20世紀(jì)初,俄植物學(xué)家茨維特提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中,將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內(nèi),然后再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進(jìn)行,植物葉子中的各種色素向下移動(dòng)逐漸形成一圈圈的色帶,茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜,所用的玻璃管內(nèi)的碳酸鈣填充物稱為固定相,洗脫用的石油醚稱為洗脫液或洗脫劑,也就是我們常說的流動(dòng)相。后來,采用該法分離了許許多多的物質(zhì),雖然分離過程中看不到色帶存在,但色譜法一直沿用至今。    
      色譜法在當(dāng)今物質(zhì)尤其是具有生物活性物質(zhì)的分離中起到舉足輕重的作用。然而在色譜發(fā)展的早期有許多的人往往將色譜看做一種藝術(shù), 但是隨著色譜理論的發(fā)展,以及色譜技術(shù)的不斷推廣,色譜逐漸的稱為了一種科學(xué)。對(duì)于從事生物大分子分離的物質(zhì)常常用一句話來形容色譜的重要作用:“色譜技術(shù)是當(dāng)今生物工程下游技術(shù)的核心”。當(dāng)今的色譜法包括分離和檢查兩部分,能夠同時(shí)實(shí)現(xiàn)分離和分析。色譜法也必定會(huì)隨著材料、生物等多學(xué)科研究的深入會(huì)更加廣泛的應(yīng)用到分離科學(xué)和分析化學(xué)之中的。   
      將一對(duì)能可逆結(jié)合和解離生物分子的一方作為配基(也稱為配體),與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯(lián)、制成專一的親和吸附劑,再用此親和吸附劑填充色譜柱,當(dāng)含有被分離物質(zhì)的混合物隨著流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱時(shí),親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結(jié)合的物質(zhì),而其他的蛋白質(zhì)及雜質(zhì)不被吸附,從色譜柱中流出,使用適當(dāng)?shù)木彌_液使被分離物質(zhì)與配基解吸附,即可獲得純化的目的產(chǎn)物。在生物體內(nèi),許多大分子具有與某些相對(duì)應(yīng)的專一分子可逆結(jié)合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補(bǔ)的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結(jié)合能力稱為親和力,根據(jù)生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的色譜法。 
      在生物體內(nèi),許多大分子具有與某些相對(duì)應(yīng)的專一分子可逆結(jié)合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補(bǔ)的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結(jié)合能力稱為親和力,根據(jù)生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的色譜法稱親色譜法。親和色譜中兩個(gè)進(jìn)行專一結(jié)合的分子互稱對(duì)方為配基。如抗原和抗體,抗原可認(rèn)為是抗體的配基,反之抗體也可認(rèn)為是抗原的配基。將一個(gè)水溶性配基在不傷害其生物學(xué)功能的情況下與水不溶性載體結(jié)合稱為配基的固相化。 親和色譜法的基本過程是: 
      1.配基固相化。將與純化對(duì)象有專一結(jié)合作用的物質(zhì),連接在水不溶性載體上,制成親和吸附劑后裝柱(稱親和性)。 
      2.親和吸附。將含有純化對(duì)象的混合物通過親和柱,純化對(duì)象吸附在柱上,其他物質(zhì)流出色譜柱。 3.解吸附。用某種緩沖液或溶液通過親和柱,把吸附在親和柱上的欲純化物質(zhì)洗脫出來 
      親和色譜是一種利用固定相的結(jié)合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質(zhì)有一定結(jié)合能力的分子,并且它們的結(jié)合是可逆的,在改變流動(dòng)相條件時(shí)二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去處或減少混合物中某一分子的含量。 親和色譜分離的通常是混合在溶液中的物質(zhì),比如細(xì)胞內(nèi)容物、培養(yǎng)基或血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時(shí)被固定相或介質(zhì)上的基團(tuán)捕獲,而溶液中其他的物質(zhì)可以順利通過色譜柱。然后把固態(tài)的基質(zhì)取出后洗脫,目標(biāo)分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子,那么只要分子能與介質(zhì)結(jié)合即可,可以不必進(jìn)行洗脫。 1.2一般流程   
      親和色譜分離的通常是混合在溶液中的物質(zhì),比如細(xì)胞內(nèi)容物、培養(yǎng)基或血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時(shí)被固定相或介質(zhì)上的基團(tuán)捕獲,而溶液中其他的物質(zhì)可以順利通過色譜柱。然后把固態(tài)的基質(zhì)取出后洗脫,目標(biāo)分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子,那么只要分子能與介質(zhì)結(jié)合即可,可以不必進(jìn)行洗脫。  1.3特殊應(yīng)用   
      親和色譜的用途很廣泛,可以用來從細(xì)胞提取物中分離純化核酸、蛋白,還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經(jīng)常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性,這些特性使蛋白選擇性地與配體結(jié)合,從而達(dá)到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。  1.4影響親和色譜的因素 
        1.4.1上樣體積  
        若目標(biāo)產(chǎn)物與配基的結(jié)合作用較強(qiáng),上樣體積對(duì)親和色譜效果影響較小。若二者間結(jié)合力較
      弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。  
        1.4.2、柱長(zhǎng)  
        親和柱的長(zhǎng)度需要根據(jù)親和介質(zhì)的性質(zhì)確定。如果親和介質(zhì)的載量高,與目標(biāo)產(chǎn)物的作用力強(qiáng),
      可以選擇較短的珠子;相反,則應(yīng)該增加柱子的長(zhǎng)度,保證目標(biāo)產(chǎn)物與親和介質(zhì)有充分的作用時(shí)間。  
        1.4.3、流速  
        親和吸附時(shí)目標(biāo)產(chǎn)物與配基之間達(dá)到結(jié)合反應(yīng)平衡需要一個(gè)緩慢的過程。因此,樣品上柱的
      流速應(yīng)盡量的慢,保證目標(biāo)產(chǎn)物與配基之間有充分的時(shí)間結(jié)合,尤其是二者間結(jié)合力弱和樣品濃度過高時(shí)。  
        1.4.4、溫度  
        溫度效應(yīng)在親和色譜中比較重要,親和介質(zhì)的吸附能力受溫度影響,可以利用不同的溫度進(jìn)行吸附和洗脫。一般情況下親和介質(zhì)的吸附能力隨溫度的升高而下降,因此在上樣時(shí)可選擇較低的溫度,使待分離物質(zhì)與配基有較大的親和力,充分地結(jié)合;而在洗脫時(shí)刻采用較高的溫度,使待分離物質(zhì)與配基的親和力下降,便于待分離物質(zhì)從配基上脫落。例如,一般選擇在4℃進(jìn)行吸附,25℃下進(jìn)行洗脫。 
      2.研究現(xiàn)狀 

      膜親和色譜是人們將親和色譜和膜技術(shù)結(jié)合起來研制的,以膜為基質(zhì)的親和色譜,其基本原理是將微濾膜或超濾膜經(jīng)表面改性活化處理后,偶聯(lián)上合適的配基,使固定在膜載體上的配基特異性地與待分離的生物大分子結(jié)合成復(fù)合物,再經(jīng)洗脫是生物大分子得以分離純化。因此親和膜色譜技術(shù)即具有膜技術(shù)分離快,處理量大的特點(diǎn),又具有親和色譜特異性高的優(yōu)點(diǎn)。目前親和膜色譜法已成為分離純化生物大分子的重要手段之一。鏈接到膜基質(zhì)上的配體分為兩大類:生物特異性配體和基團(tuán)特異性配體,后者又稱為通用性配體。以此為依據(jù),可以對(duì)膜親和色譜法進(jìn)行分類,常見的有生物親和色譜,免疫親和色譜,金屬螯合親和色譜等。 
        生物親和色譜中連接到基質(zhì)上的配體是存在特異性相互作用的生物大分子,如酶與底物,酶與抑制劑,激素與受體等,因而具有高度的選擇性。但是這類生物大分子通常價(jià)格昂貴且不易連接到基質(zhì)上,限制了它們?cè)诖笠?guī)模工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。 
        免疫親和色譜是將抗原抗體中的一方連接到基質(zhì)上來吸附純化另一方的色譜分離技術(shù)。隨著可利用的單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展,免疫親和色譜的應(yīng)用日益廣泛,期工業(yè)化應(yīng)用前景廣闊。 
      金屬螯合親和色譜又稱固定化金屬螯合親和色譜,是Porath等首先提出來的。在上世紀(jì)70年代他們將銅離子、鋅離子通過螯合劑亞氨基二乙酸交聯(lián)到Agatose上,利用金屬離子與蛋白質(zhì)表面組氨酸等的配位作用選擇性的分離對(duì)金屬離子有親和里的蛋白質(zhì)。期理論基礎(chǔ)是不同條件下配位鍵的形成和解離,即過渡金屬離子(銅,鐵,鋅,鎳等)與蛋白質(zhì)表面的組氨酸,色氨酸,半胱氨酸等電子供體形成配位復(fù)合物,因而連接上這些金屬離子的載體就能選擇性的吸附含有咪唑基或巰基的肽類或蛋白質(zhì)。吸附力的大小在很大程度上取決于蛋白分子表面咪唑基或巰基的稠密程度。此外,不同的金屬離子對(duì)親和力大小也有影響。80年代,人們又提出用微孔的膜作支撐基質(zhì),充分發(fā)揮了膜過程設(shè)備簡(jiǎn)單,易放大,成本低,分離速度快,可連續(xù)操作等優(yōu)點(diǎn),是生物工程產(chǎn)品的工業(yè)化大規(guī)模分離純化得以實(shí)現(xiàn)。一、中國(guó)色譜技術(shù)的發(fā)展歷程有機(jī)高分子方面應(yīng)用  
      親和色譜作為液相色譜的一個(gè)重要分支,對(duì)于生物大分子的分離純化是有特殊意義的。如果說前面所介紹的幾種色譜方法都是通用性分離技術(shù)的話,那么;23 方法則基本上是屬于專一性的,前者是根據(jù)溶質(zhì)分子之間在物理化學(xué)性質(zhì)方面的差異所建立的分離方法,后者則利用了生物分子之間特異性相互作用而實(shí)現(xiàn)分離的。這種特異性相互作用是活性生物大分子固有的特征,例如酶能與底物、抑制物、輔酶等結(jié)合,抗體能與互補(bǔ)的抗原相結(jié)合,凝集素能與細(xì)胞的表面抗原以及某些糖類相結(jié)合,激素能與蛋白及細(xì)胞受體形成復(fù)合物,基因可與核酸和阻遏蛋白相互作用等等。所以,原則上講,如果在固相載體上連接一種具有生物特異性的配基,就可以建立一種親和色譜方法,用于分離與配基相對(duì)應(yīng)的物質(zhì)。 
          親和色譜的顯著特點(diǎn)是,具有其他分離技術(shù)所不能比擬的高選擇性,而且能有效地保持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,活性樣品的回收率也比較高,所以這種技術(shù)用于純化酶、抗體、核酸、輔助因子和各種能識(shí)別、貯存和運(yùn)載具有生化和藥理作用物質(zhì)的蛋白質(zhì),用于生物樣品解離常數(shù)和平衡常數(shù)以及動(dòng)力學(xué)序列和結(jié)合機(jī)制的研究等,都是很有意義的。 
          有機(jī)高分子類型的AFC填料,按其基質(zhì)材料,可分為多糖型和高聚物型兩大類;按其配體性能即填料所攜帶配體對(duì)被分密物質(zhì)的選擇性特征,可分為性和通用性兩大類。性填料,例如基于抗原與抗體、激素與受體蛋白等特異性相互作用的填料,其配體對(duì)于目標(biāo)化合物有很高的特異選擇性和親和能力。通用性填料因其配體可與數(shù)種生物分子產(chǎn)生親和作用,顯然達(dá)不到專一的選擇性,但這類配體的種類很多,價(jià)格低廉而容易獲得,應(yīng)用范圍非常廣泛,所以在親和色譜中仍處于主導(dǎo)地位。常見的通用性親和配體,主要包括金屬螫合配體(如螫合 
      了Cu2+、Ni2+、Zn2+ 等金屬離子的配體),小分子類配體(如氨基酸、肽類、明膠、肝素等),顏料類親和配體,外源凝集素類親和配體(如刀豆球蛋白A、扁豆外源凝集素、麥芽外源凝集素等)、核酸與核苷酸類親和配體。 
          從親和配體的連接方式來看,既可以將配體與基質(zhì)直接偶聯(lián),也可以在基質(zhì)與配體之間插入一如適當(dāng)長(zhǎng)度的鏈狀間隔臂。大量研究表明帶有間隔臂的AFC填料往往具有更為優(yōu)異的色譜性能,由于適當(dāng)?shù)拈g隔壁鏈段可以有效地克服基質(zhì)表面的幾何位阻效應(yīng),使得配體更容易與被分離物質(zhì)相結(jié)合。對(duì)于以小分子為配體來分離大分子的親和填料來說,間隔臂的作用就更為重要了。AFC填料的間隔臂按其結(jié)構(gòu)類型,主要包括脂肪鏈的烴類、鏈狀的聚胺類、肽類、鏈狀聚醚類等。間隔臂有親水性的,也有疏水性的,間隔臂鏈段長(zhǎng)度則視其結(jié)構(gòu)與性能不同而 
      異,例如疏水性的脂肪烴類鏈段,一般為2-10個(gè)亞甲基的長(zhǎng)度,過長(zhǎng)會(huì)因其自身返折而失去作用,也會(huì)因其產(chǎn)生強(qiáng)疏水性吸附而對(duì)蛋白質(zhì)的分離不利。 
      3.在我國(guó)發(fā)展?fàn)顩r 
      3.1發(fā)展歷史 
        新中國(guó)成立之后,色譜技術(shù)zui初只應(yīng)用于石油領(lǐng)域,到了20世紀(jì)60年代,才開始應(yīng)用于國(guó)防領(lǐng)域。新中國(guó)的色譜技術(shù)在老一輩色譜科學(xué)家的帶領(lǐng)下,取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步: 
        1954年,盧佩章院士首先把氣-固色譜法的體積色譜成功的應(yīng)用于水煤氣合成產(chǎn)品的氣體組分分析; 
        1956年成功開展氣液的體積色譜成功用于石油產(chǎn)品分析; 
       
        1961年朱葆琳領(lǐng)導(dǎo)丁景群開展了毛細(xì)管色譜的研究,并成功地用于石油產(chǎn)品的分析;   1964年*顆原zi彈爆炸前,zui后獲得的鈾235金屬中的痕量氣體分析,我國(guó)的色譜工作者在1963年1月份就開始本項(xiàng)金屬中痕量氬的測(cè)定,并與年底完成; 
        1956-1958年發(fā)表了用液相色譜分析石油,油頁巖和煤焦油組成的結(jié)果,建立了用碘和碘仿作為柱內(nèi)顯譜劑的快速測(cè)定烷、烯、芳三元組成分析方法樣品用量0.5ml,分析誤差在1%以內(nèi),平均分析時(shí)間為1h,并將分配色譜和紫外光譜聯(lián)合的方法用于分析低沸點(diǎn)酚類的單體組成; 
        20世紀(jì)60年代后期,現(xiàn)代液相色譜技術(shù)獲得飛速發(fā)展,引起了國(guó)內(nèi)色譜界的重視,1974年,盧佩章等開始從事液相色譜研究,針對(duì)了當(dāng)時(shí)液相色譜的兩個(gè)主要矛盾:一是儀器設(shè)備,二是固定相,開展了微粒型硅膠及其各種化學(xué)鍵合相得研究,并提供了產(chǎn)品供應(yīng)的國(guó)內(nèi)需求; 
        1968-1974年完成核潛艇用船用色譜儀;連續(xù)測(cè)定密閉艙中的大量和微量有毒氣體的組成,確保了潛艇人員在水下長(zhǎng)期作業(yè)的生命安全和生活需要,這也是當(dāng)時(shí)世界的船用色譜儀;

      文化大革命后,隨著改革開放的到來,中國(guó)色譜技術(shù)有了高速的發(fā)展,應(yīng)用領(lǐng)域也在擴(kuò)大,主要的應(yīng)用領(lǐng)域如下: 
        ·石油和石油化工分析:油氣田勘探中的化學(xué)分析、原油分析、煉廠氣分析、模擬蒸餾、油料分析、單質(zhì)烴分析、含硫/含氮/含氧化合物分析、汽油添加劑分析、脂肪烴分析、芳烴分析; 
        ·環(huán)境分析:大氣污染物分析、水分析、土壤分析、固體廢棄物分析; 
        ·食品分析:農(nóng)藥殘留分析、香精香料分析、添加劑分析、脂肪酸甲酯分析、食品包裝材料分析;   ·藥物和臨床分析:雌三醇分析、兒茶酚胺代謝產(chǎn)物分析、尿中孕二醇和孕三醇分析、血漿中睪丸激素分析、血液中乙醇/麻醉劑及氨基酸衍生物分析; 
        ·農(nóng)藥殘留物分析:有機(jī)氯農(nóng)藥殘留分析、有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析、殺蟲劑殘留分析、除草劑殘留分析等; 
        ·精細(xì)化工分析:添加劑分析、催化劑分析、原材料分析、產(chǎn)品質(zhì)量控制; 
        ·聚合物分析:?jiǎn)误w分析、添加劑分析、共聚物組成分析、聚合物結(jié)構(gòu)表征/聚合物中的雜質(zhì)分析、熱穩(wěn)定性研究; 
        ·合成工業(yè):方法研究、質(zhì)量監(jiān)控、過程分析; 
        1980年,張宗炳指導(dǎo)研究生,用紙層析及液相色譜(HPLC)方法鑒定出這種芳香胺類為酪胺; 
      20世紀(jì)80年代到21世紀(jì)初,是色譜技術(shù)發(fā)展zui快的20年,許多嶄新的色譜法方法開始出現(xiàn),如在氣相色譜中的毛細(xì)管柱工藝的發(fā)展,毛細(xì)管超臨界流體色譜和超臨界流體萃取的興起,毛細(xì)管電泳的發(fā)展,電名譜加入色譜的行列,場(chǎng)流分離為生物大分子的分離提供了新的途徑等等。21世紀(jì)將是生命科學(xué),材料科學(xué),信息科學(xué),和環(huán)境科學(xué)的時(shí)代,而環(huán)境科學(xué)又是人們面臨的重大課題,色譜法新方法的出現(xiàn)和發(fā)展正是服務(wù)于這些重要科室領(lǐng)域的新技術(shù)。為了生物大分子的分離和純化,推動(dòng)了毛細(xì)管電泳和全新的液相色譜的發(fā)展;為了解決藥物對(duì)映異構(gòu)體的拆分,發(fā)展了各種各樣的手性分離介質(zhì);為了極數(shù)微量環(huán)境污染物的檢測(cè),發(fā)展了各種色譜高靈敏檢測(cè)器;為了適應(yīng)石油化工的需要,出現(xiàn)了各種高溫毛細(xì)管氣相色譜法方法;為了能高選擇性地分離生化分子,發(fā)展發(fā)選擇性*的親和色譜柱和方法為了有效快速地分離蛋白質(zhì)和多肽發(fā)展了整體色譜柱。另一方面,為了彌補(bǔ)色譜法定性功能較差的弱點(diǎn),大力發(fā)展了色譜和其他儀器的聯(lián)用技術(shù),特別是液相色譜、氣相色譜和毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)近年已趨于成熟,對(duì)生物大分子的分離和鑒定發(fā)揮極大的作用,因此色譜儀和其他各種儀器的聯(lián)合使用將成為分析化學(xué)的重要領(lǐng)域。 
      3.2新中國(guó)色譜儀器行業(yè)的興起 

      1953年在新中國(guó)*個(gè)五年計(jì)劃中,由盧佩章院士領(lǐng)導(dǎo)的研發(fā)小組設(shè)計(jì)出我國(guó)*臺(tái)體積色譜儀,使分析石油樣品的速度由原來的30多個(gè)小時(shí)縮短到不到1小時(shí),而且所用樣品量?jī)H是原來的千分之一; 
        1962年,徐民宗等先后研制了101A型及P-150型氣相色譜儀。P-150型氣相色譜儀由大化所儀器廠小批量生產(chǎn)供院內(nèi)研究所使用; 
        1963年,朱葆琳、丁景群 等研制成SP-01型氫火焰離子化鑒定毛細(xì)管色譜儀并推廣到北京科學(xué)儀器廠生產(chǎn); 
        1964年,汪驥、鐘衡等成功研制的SP-02型氫火焰離子化鑒定器填充柱氣相色譜儀。在國(guó)內(nèi)建立了*個(gè)色譜儀器生產(chǎn)廠---大連市第二儀表廠; 
        1965年,研制了SP-04型高純*性氣體自動(dòng)分析色譜儀,用于分析純氮中的雜質(zhì)氧、氬,或者純氬中的雜質(zhì)氧、氮,由南京分析儀器廠生產(chǎn); 
        1965年,丁景群、陳大衛(wèi)等研制成用于制備高純化合物的PSZ-1型自動(dòng)化制備色譜儀。并在此基礎(chǔ)上,在朱葆琳的指導(dǎo)下有進(jìn)一步放大研制成大型工業(yè)自動(dòng)化制備色譜裝置,1969年應(yīng)用于天津試劑二廠試劑生產(chǎn); 
        1973年,完成兩種不同要求的密閉船內(nèi)大氣自動(dòng)分析色譜儀,分別提供七機(jī)部五院及邯鄲109*,供飛船及潛艇使用; 
        1973年,由楊書明、周良模等成功研制出實(shí)驗(yàn)室通用的SP-08型多用氣相色譜儀; 
        1981年,唐學(xué)淵、鐘秀貞等在國(guó)內(nèi)成功用微機(jī)進(jìn)行自動(dòng)控制與數(shù)據(jù)處理氦氣純度分析儀。   中國(guó)的色譜事業(yè)在zui近三十年里得到了飛躍性的發(fā)展,國(guó)內(nèi)的色譜儀器廠家風(fēng)生水起,面對(duì)國(guó)外品牌的競(jìng)爭(zhēng),依然在國(guó)內(nèi)分析市場(chǎng)上占有一席之地,并保持了良好的發(fā)展勢(shì)頭,我們深信中國(guó)色譜儀器行業(yè)終將走出,走向世界。 
      三、新中國(guó)色譜技術(shù)走向世界國(guó)內(nèi)色譜 
        技術(shù)蓬勃發(fā)展,中國(guó)色譜專家同時(shí)也非常注重間色譜技術(shù)的交流。隨著間交流加深,中國(guó)的色譜技術(shù)已經(jīng)跟上了世界的步伐: 
        1959年,盧佩章院士應(yīng)邀參加前蘇聯(lián)*次全蘇色譜會(huì)上作大會(huì)報(bào)告,并在前蘇聯(lián)色譜創(chuàng)始人的著作和前民主德國(guó)的著作中被引用; 
        1960年,民主德國(guó)色譜學(xué)會(huì)主席struppe博士發(fā)表在其所著的《氣相色譜的新進(jìn)展》一書中共收錄了三篇過過學(xué)術(shù)文章,其中包括盧佩章院士在全蘇色譜會(huì)議上的大會(huì)報(bào)告;改革開放后,中國(guó)的色譜技術(shù)迅速發(fā)展,中國(guó)的色譜技術(shù)再次走出走向世界,中國(guó)與德國(guó)開展可深入的交流。1981年11月份中德*屆色譜會(huì)議在大連召開標(biāo)志著中國(guó)正式與德國(guó)建立又好的學(xué)術(shù)交流關(guān)系,迄今為止中的色譜會(huì)議已經(jīng)成功舉辦七屆; 
        1980年P(guān)E公司到大連化物所研究考察;   1982中國(guó)參加匹茲堡會(huì)議;   1981年中德色譜會(huì)議在大連召開, 
        1985年首屆BECIA大會(huì)在北京召開,上大多數(shù)的色譜學(xué)者參加了本次會(huì)議,促進(jìn)了中國(guó)色譜技術(shù)與國(guó)外色譜技術(shù)的交流,標(biāo)志著中過色譜事業(yè)已經(jīng)成功與世界色譜事業(yè)接軌,中國(guó)有了自己的分析科學(xué)與儀器方面的會(huì)議; 
      近年來,中國(guó)的色譜研究有了較大的發(fā)展,取得了一些在上有影響的成果,在*學(xué)術(shù)期刊上發(fā)表了相當(dāng)數(shù)量的論文,為國(guó)家的經(jīng)濟(jì)發(fā)展作出了貢獻(xiàn),這是應(yīng)當(dāng)充分肯定的。特別是色譜與生命科學(xué)的交叉研究、色譜與其它分析技術(shù)的聯(lián)用表現(xiàn)得異?;钴S。 
      近年來,利用固定化金屬螯合親和膜分離純化蛋白質(zhì)的研究取得了很大進(jìn)展。美國(guó)公司曾報(bào)道用以木纖維為原料的復(fù)合纖維素離子交換機(jī)金屬螯合膜色譜分離純化人尿激酶;鮑時(shí)翔等人采用中空纖維膜成功的 從人血清中分離出免疫球蛋白。另據(jù)報(bào)道,Iwata等在聚丙烯膜上接枝甲基丙烯酸縮水甘油酯,制得銅離子親和膜用于吸附含有組氨酸-亮氨酸的多肽以及牛血清蛋白。Klaus等則以化學(xué)改性的聚砜作為膜材料,制得金屬離子螯合親和膜,用于組氨酸,苯丙氨酸,蘇氨酸和丙氨酸等小分子氨基酸混合物的分離等開展了用聚乙酰氨基葡萄糖親和膜分離溶菌酶的研究。 
      隨著研究的深入,科學(xué)家又提出通過遺傳學(xué)的重組技術(shù),在待分離的蛋白質(zhì)表面連接上對(duì)金屬離子有親和性的氨基酸殘基(如組氨酸,半胱氨酸,色氨酸等),以促進(jìn)蛋白質(zhì)的分離和純化,使固定化金屬螯合親和膜分離純化蛋白質(zhì)的應(yīng)用前景更加廣闊。

      4.結(jié)論 
      本文給出了親和色譜的原理過程及發(fā)展歷史,隨著親和色譜在生物化工,化學(xué)方面的廣泛應(yīng)用及廣闊的發(fā)展前景,隨著研究的深入,必將成為各項(xiàng)科學(xué)發(fā)展各一項(xiàng)重要技術(shù),將會(huì)發(fā)揮越來越重要的作用。     
      主要參考文獻(xiàn) 
      【1】 于世林。親和色譜方法及應(yīng)用。 北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2008 
      【2】 張津輝  蔣中華 馬立人。親和色譜進(jìn)展。北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所,1999 【3】 盧時(shí)湧  吳章桂。應(yīng)用前沿親和色譜研究分子之間相互作用及其應(yīng)用。杭州; 浙江工業(yè)大學(xué) 2010   

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